crispr-cas9是目前操作最简便、耗时最短的基因编辑技术,已广泛应用于多种物种的基因编辑[1]。crispr-cas9的应用形式通常是构建一个含有特定物种内源性启动子并连接cas9基因和sgrna的质粒,并将其转入细胞或体内表达。然而,质粒的构建和验证过程繁琐,耗费大量的实验时间;并且质粒转入细胞或体内后,其降解需要一段时间,这可能会对后续实验产生影响。

为提高crispr-cas9实验效率,保障实验效果,泓迅科技推出即用型sgrna合成服务,可以完成sgrna靶位点的设计、sgrna dna模板的合成、sgrna体外转录以及sgrna的纯化,为客户提供可转入动物细胞并直接发挥作用的sgrna。泓迅科技即用型sgrna为您省去了质粒构建过程,消除滞留质粒对后续实验的潜在影响,节约实验时间。目前,体外转录的sgrna已成功的对斑马鱼[2]、小鼠[3]以及丝状真菌[4]等物种中的基因进行了准确的编辑。

此外,设计3条人和大鼠通用的negative control sgrna (syno® negative control sgrna1,syno® negative control sgrna2,syno® negative control sgrna3),这3条negative control sgrna不能靶向人和大鼠的基因序列,可以用作crispr/cas9基因编辑的阴性对照实验。

即用型crispr-cas9 sgrna合成服务优势:

  1. 一站式服务:可以提供从sgrna靶位点设计到高纯度即用型sgrna获取的全部过程
  2. 周期短:最快3个工作日交付产量可达20ug
  3. 方便快捷:即用型sgrna可直接注射或转染细胞进行基因编辑实验

即用型crispr-cas9 sgrna合成泓迅案例:

泓迅科技crispr-cas9 sgrna设计中心针对小鼠的多个基因各设计了8个sgrna,然后进行体外sgrna转录实验,实验周期短至2天,sgrna制备量为10-20ug,可以极快地满足相关细胞学实验的一般需求。

实验流程:

一步法合成grna dna模板

一步法合成grna dna模板

grna-dna

实验结果:

  1. 将grna dna模板平连至puc57载体测序,比对结果与设计序列一致。如图1所示。
  2. 图1.平连结果与设计序列比对图

    图1.平连结果与设计序列比对图

  3. 将通过体外转录得到的sgrna在2%的琼脂糖中进行电泳,可以看到清晰条带。如图2所示。
  4. 图2. sgrna琼脂糖凝胶电泳图

    图2. sgrna琼脂糖凝胶电泳图

  5. 对其中一条sgrna序列进行验证,首先将sgrna逆转录获得cdna,设计sgrna扩增引物,经过pcr反应获得sgrna的dna序列;其次将dna序列平连至puc57载体进行测序,结果显示sgrna序列正确。如图3所示。
  6. 图3. sgrna序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    图3. sgrna序列验证琼脂糖凝胶电泳图

    注:1pcr结果的模板是sgrna 逆转录cdna;2pcr结果的模板是经dnasei处理的sgrna;3pcr结果的模板是体外转录的dna模板

即用型crispr-cas9 sgrna合成服务周期及价格:

服务名称 产品/服务内容 交付周期 交付项目 价格
即用型sgrna合成
  1. sgrna设计
  2. dna模板合成
  3. 体外转录sgrna及纯化
  1. <10条,5个工作日
  2. 2.10-20条,10个工作日
  3. >20条,咨询
sgrna coa文件 询价
syno® negative control sgrna
  1. negative control sgrna
  2. 体外转录sgrna及纯化
3条,5个工作日 3条syno® negative control sgrna 询价

即用型crispr-cas9 sgrna合成订购与咨询:
您可以通过以下任意方式下单或咨询,工作时间保证在1小时内给您反馈:

  1. email:请将您的需求发送到support@synbio-tech.com
  2. 电话咨询:您可以直接拨打免费热线4000-973-630转803联系经验丰富的工程师
  3. qq咨询:任何技术问题均可与在线互动,泓迅科技官方企业qq:4000-973-630

参考文献:

[1]jinek m, chylinski k, fonfara i, hauer m, doudna ja, charpentier e. a programmable dual-rna-guided dna endonuclease in adaptive bacterial immunity [j]. science. 2012,337(6096):816-821.
[2]xiao a, wang z, hu y, et al. chromosomal deletions and inversions mediated by talens and crispr/cas in zebrafish [j]. nucleic acids res. 2013,41(14):e141.
[3]fujii w, kawasaki k, sugiura k, naito k. efficient generation of large-scale genome-modified mice using grna and cas9 endonuclease [j]. nucleic acids res. 2013,41(20):e187.
[4]liu r, chen l, jiang y, zhou z, zou g. efficient genome editing in filamentous fungus trichoderma reesei using the crispr/cas9 system. cell discovery. 2015.7.