基因组筛选方法检测小鼠体内肿瘤细胞的生长和转移情况

【背景】

使用crispr-cas9文库可以对小鼠体内的全基因组进行筛选,造成基因组功能缺失的突变,以揭示能够调节肺癌细胞增殖和转移的基因。通过此方法在癌症小鼠体内筛选出的基因与人类肺癌细胞的转移和生长也有一定的相关性。利用crispr-cas9全基因组文库筛选方法可广泛用于肿瘤细胞的生长和侵袭过程的研究,对于控制癌症细胞生长和抑制癌症侵袭具有一定的研究意义,也为癌症治疗药物的靶点筛选提供了新方法。

【方法】

  1. 构建了cas9-egfp细胞系并构建一个包含67,405个sgrna的全基因组敲除文库,使用慢病毒转染cas9-egfp稳定细胞系后得到突变的细胞文库,将经过sgrna突变的细胞文库注射到小鼠体内,观察癌细胞转移情况(图1);
  2. 根据荧光蛋白位置观察癌细胞转移情况,筛选得到突变细胞,对其基因组ngs测序后得到能够显著促进癌症转移的基因,并构建一个包含624个sgrna的基因组文库对这些基因进行突变。
  3. 全基因组文库筛选流程

【结论】

  1. 利用crispr-cas9文库对小鼠体内全基因组筛选后,发现nf2、pten、cdkn2a、trim72、fga、mir-345及mir-152基因能够促进非小细胞肺癌细胞侵袭,且这些基因与原发性肿瘤的生长和侵袭成正相关;
  2. crispr-cas9全基因组筛选可以作为一个有效的方法去系统、全面的分析体内癌症演变过程中基因的一些表现型。

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参考文献

  1. chen, s., et al., genome-wide crispr screen in a mouse model of tumor growth and metastasis. cell, 2015. 160(6): p. 1246-60.